Nature.com saytına daxil olduğunuz üçün təşəkkür edirik. İstifadə etdiyiniz brauzer versiyasında CSS dəstəyi məhduddur. Ən yaxşı təcrübə üçün yenilənmiş brauzerdən istifadə etməyinizi (və ya Internet Explorer-də uyğunluq rejimini söndürməyinizi) tövsiyə edirik. Bu vaxt ərzində davamlı dəstəyi təmin etmək üçün saytı stillər və JavaScript olmadan göstərəcəyik.
Yüksək yükləmə tərkibinə malik insulin nanopartikulları (NP) müxtəlif dozaj formalarında fərqli tətbiqlər tapmışdır. Bu işin məqsədi dondurma ilə qurutma və spreylə qurutma proseslərinin insulinlə yüklənmiş xitosan nanopartikullarının strukturuna təsirini qiymətləndirməkdir, krioprotektor kimi mannitol ilə və ya olmadan. Biz həmçinin bu nanopartikulların keyfiyyətini yenidən həll etməklə qiymətləndirdik. Susuzlaşdırmadan əvvəl xitosan/natrium tripolifosfat/insulin çarpaz əlaqəli nanopartikullarının hissəcik ölçüsü 318 nm, PDI 0,18, kapsullaşdırma səmərəliliyi 99,4% və yükləmə 25,01% olaraq optimallaşdırıldı. Bərpa edildikdən sonra, mannitol istifadə etmədən dondurma ilə qurutma üsulu ilə istehsal edilənlər istisna olmaqla, bütün nanopartikullar sferik hissəcik quruluşunu qoruyub saxladılar. Hər iki spreylə qurudulmuş mannitol tərkibli nanopartikullarla müqayisədə mannitolsuz spreylə qurudulmuş nanopartikullar da ən kiçik orta hissəcik ölçüsünü (376 nm) və ən yüksək yükləməni göstərdilər. Qurutma və ya dondurma-qurutma üsulları ilə oxşar kapsullaşdırma dərəcəsi (98,7%) və PDI (0,20) ilə tərkib (25,02%). Mannitol olmadan sprey qurutma ilə qurudulmuş nanopartikullar həmçinin insulinin ən sürətli buraxılmasına və hüceyrə tərəfindən mənimsənilmənin ən yüksək səmərəliliyinə səbəb oldu. Bu iş göstərir ki, sprey qurutma ənənəvi dondurma qurutma üsulları ilə müqayisədə krioprotektorlara ehtiyac olmadan insulin nanopartikullarını susuzlaşdıra bilər və bu da daha böyük yükləmə qabiliyyəti, daha aşağı aşqar tələbləri və əməliyyat xərcləri yaradır. Bu, əhəmiyyətli üstünlükdür.
1922-ci ildə kəşf edildiyi vaxtdan bəri21,2,3, insulin və onun əczaçılıq preparatları 1-ci tip diabet (T1DM) və 2-ci tip diabet (T1DM) xəstələrinin həyatını xilas etmişdir. Lakin, yüksək molekulyar çəkili zülal kimi xüsusiyyətlərinə görə insulin asanlıqla aqreqasiya olunur, proteolitik fermentlər tərəfindən parçalanır və ilk keçid effekti ilə aradan qaldırılır. 1-ci tip diabet diaqnozu qoyulmuş insanlara ömürlərinin sonuna qədər insulin inyeksiyaları lazımdır. İlkin olaraq 2-ci tip diabet diaqnozu qoyulmuş bir çox xəstəyə uzunmüddətli insulin inyeksiyaları da lazımdır. Gündəlik insulin inyeksiyaları bu şəxslər üçün ciddi gündəlik ağrı və narahatlıq mənbəyidir və zehni sağlamlığa mənfi təsir göstərir. Nəticədə, oral insulin tətbiqi kimi daha az narahatlıq yaradan digər insulin tətbiqi formaları geniş şəkildə öyrənilir5, çünki onlar dünyada təxminən 5 milyard diabet xəstəsinin həyat keyfiyyətini bərpa etmək potensialına malikdir.
Nanohissəcik texnologiyası oral insulin qəbul etmək cəhdlərində əhəmiyyətli bir irəliləyiş təmin etmişdir4,6,7. Bu texnologiya insulini effektiv şəkildə kapsullaşdırır və müəyyən bədən nahiyələrinə hədəf çatdırılması üçün parçalanmadan qoruyur. Bununla belə, nanohissəcik formulalarının istifadəsinin bir sıra məhdudiyyətləri var, əsasən hissəcik suspenziyalarının stabillik problemləri ilə əlaqədardır. Saxlama zamanı bəzi aqreqasiyalar baş verə bilər ki, bu da insulinlə yüklənmiş nanohissəciklərin biomənimsənilməsini azaldır8. Bundan əlavə, insulin nanohissəciklərinin (NP) stabilliyini təmin etmək üçün nanohissəciklərin və insulinin polimer matrisinin kimyəvi stabilliyi də nəzərə alınmalıdır. Hal-hazırda, dondurma ilə qurutma texnologiyası saxlama zamanı istənməyən dəyişikliklərin qarşısını alarkən stabil NP-lər yaratmaq üçün qızıl standartdır9.
Lakin, dondurma ilə qurutma, NP-lərin sferik quruluşunun buz kristallarının mexaniki gərginliyindən təsirlənməsinin qarşısını almaq üçün krioprotektorların əlavə edilməsini tələb edir. Bu, krioprotektorun çəki nisbətinin çox hissəsini tutduğu üçün liyofilizasiyadan sonra insulin nanopartikullarının yükünü əhəmiyyətli dərəcədə azaldır. Buna görə də, istehsal olunan insulin NP-ləri, insulinin terapevtik pəncərəsinə çatmaq üçün çox miqdarda quru nanopartikullara ehtiyac duyulduğu üçün tez-tez oral tabletlər və oral filmlər kimi quru toz formulalarının istehsalı üçün yararsız hesab olunur.
Sprey qurutma, əczaçılıq sənayesində maye fazalardan quru tozların istehsalı üçün tanınmış və ucuz sənaye miqyaslı bir prosesdir10,11. Hissəciklərin əmələ gəlməsi prosesinə nəzarət bir neçə bioaktiv birləşmənin düzgün şəkildə kapsullaşdırılmasına imkan verir12,13. Bundan əlavə, oral qəbul üçün kapsullanmış zülalların hazırlanması üçün təsirli bir texnikaya çevrilmişdir. Sprey qurutma zamanı su çox tez buxarlanır ki, bu da hissəcik nüvəsinin temperaturunu aşağı saxlamağa kömək edir11,14 və istiliyə həssas komponentləri kapsullaşdırmaq üçün tətbiqinə imkan verir. Sprey qurutmadan əvvəl örtük materialı kapsullanmış maddələri ehtiva edən məhlul ilə yaxşıca homogenləşdirilməlidir11,14. Dondurma ilə qurutmadan fərqli olaraq, sprey qurutmada kapsullaşdırmadan əvvəl homogenləşdirmə susuzlaşdırma zamanı kapsullaşdırma səmərəliliyini artırır. Sprey qurutma kapsullaşdırma prosesi krioprotektorlar tələb etmədiyindən, sprey qurutma yüksək yükləmə tərkibinə malik qurudulmuş NP-lər istehsal etmək üçün istifadə edilə bilər.
Bu tədqiqat, ion gel metodundan istifadə edərək xitosan və natrium tripolifosfatın çarpaz bağlanması yolu ilə insulinlə yüklənmiş NP-lərin istehsalını bildirir. İon gelasiyası, müəyyən şərtlər altında iki və ya daha çox ion növü arasında elektrostatik qarşılıqlı təsirlər vasitəsilə nanopartikulların istehsalına imkan verən bir hazırlama metodudur. Optimallaşdırılmış xitosan/natrium tripolifosfat/insulin çarpaz əlaqəli nanopartikulları susuzlaşdırmaq üçün həm dondurma ilə qurutma, həm də sprey ilə qurutma üsullarından istifadə edilmişdir. Susuzlaşdırmadan sonra onların morfologiyası SEM ilə təhlil edilmişdir. Onların rekombinasiya qabiliyyəti ölçü paylanması, səth yükü, PDI, kapsullaşdırma səmərəliliyi və yükləmə tərkibi ölçülməklə qiymətləndirilmişdir. Müxtəlif susuzlaşdırma metodları ilə istehsal olunan yenidən həll olmuş nanopartikulların keyfiyyəti də onların insulin qorunması, buraxılma davranışı və hüceyrə udma effektivliyi müqayisə edilərək qiymətləndirilmişdir.
Qarışıq məhlulun pH-ı və xitosan və insulinin nisbəti, son NP-lərin hissəcik ölçüsünə və kapsullaşma səmərəliliyinə (EE) təsir edən iki əsas amildir, çünki onlar birbaşa ionotrop jelləşmə prosesinə təsir göstərir. Qarışıq məhlulun pH-ının hissəcik ölçüsü və kapsullaşma səmərəliliyi ilə yüksək dərəcədə əlaqəli olduğu göstərilmişdir (Şəkil 1a). Şəkil 1a-da göstərildiyi kimi, pH 4.0-dan 6.0-a yüksəldikcə orta hissəcik ölçüsü (nm) azalmış və EE əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır, pH 6.5-ə yüksəldikdə isə orta hissəcik ölçüsü artmağa başlamış və EE dəyişməz qalmışdır. Xitosan və insulin nisbəti artdıqca orta hissəcik ölçüsü də artır. Bundan əlavə, nanopartikullar 2.5:1-dən (ç/ç) yüksək xitosan/insulin kütlə nisbətində hazırlandıqda EE-də heç bir dəyişiklik müşahidə edilməmişdir (Şəkil 1b). Buna görə də, bu tədqiqatda optimal hazırlıq şərtləri (pH 6.0, xitosan/insulin kütlə nisbəti 2.5:1) insulinlə yüklənmiş nanopartikulları sonrakı tədqiqatlar üçün hazırlamaq üçün istifadə edilmişdir. Bu hazırlıq şəraitində insulin nanopartikullarının orta hissəcik ölçüsü 318 nm (Şəkil 1c), PDI 0,18, yerləşdirmə səmərəliliyi 99,4%, zeta potensialı 9,8 mv və insulin yüklənməsi 25,01% (m/m) olaraq optimallaşdırılmışdır. Transmissiya elektron mikroskopiyasının (TEM) nəticələrinə əsasən, optimallaşdırılmış nanopartikullar təxminən sferik və nisbətən vahid ölçüdə diskret idi (Şəkil 1d).
İnsulin nanopartikullarının parametr optimallaşdırılması: (a) pH-ın insulin nanopartikullarının (xitosan və insulinin 5:1 kütlə nisbətində hazırlanmış) orta diametrinə və kapsullaşdırma səmərəliliyinə (EE) təsiri; (b) xitosan və insulinin kütlə nisbətinin insulin NP-lərinin (pH 6-da hazırlanmış) orta diametrinə və kapsullaşdırma səmərəliliyinə (EE) təsiri; (c) optimallaşdırılmış insulin nanopartikullarının hissəcik ölçüsü paylanması; (d) optimallaşdırılmış insulin NP-lərinin TEM mikroqrafı.
Məlumdur ki, xitosan 6,5 pKa olan zəif bir polielektrolitdir. Əsas amin qrupu hidrogen ionları ilə protonlaşdığı üçün turşu mühitində müsbət yüklənir15. Buna görə də, o, tez-tez mənfi yüklü makromolekulları kapsullaşdırmaq üçün daşıyıcı kimi istifadə olunur. Bu tədqiqatda xitosan 5,3 izoelektrik nöqtəsi olan insulini kapsullaşdırmaq üçün istifadə edilmişdir. Xitosan örtük materialı kimi istifadə edildiyindən, onun nisbətinin artması ilə nanopartikulların xarici təbəqəsinin qalınlığı müvafiq olaraq artır və nəticədə orta hissəcik ölçüsü daha böyük olur. Bundan əlavə, daha yüksək səviyyəli xitosan daha çox insulini kapsullaşdıra bilər. Bizim vəziyyətimizdə, xitosan və insulinin nisbəti 2,5:1-ə çatdıqda EE ən yüksək idi və nisbət artmağa davam etdikdə EE-də əhəmiyyətli bir dəyişiklik olmadı.
Xitosan və insulinin nisbətindən əlavə, pH da NP-lərin hazırlanmasında mühüm rol oynamışdır. Qan və digərləri 17 pH-ın xitosan nanopartikullarının hissəcik ölçüsünə təsirini araşdırdılar. Onlar pH 6.0-a çatana qədər hissəcik ölçüsündə davamlı azalma aşkar etdilər və pH > 6.0-da hissəcik ölçüsündə əhəmiyyətli bir artım müşahidə edildi ki, bu da müşahidələrimizlə uyğundur. Bu fenomen, pH-ın artması ilə insulin molekulunun mənfi səth yükü qazanması və beləliklə, xitosan/natrium tripolifosfat (TPP) kompleksi ilə elektrostatik qarşılıqlı təsirlərə üstünlük verməsi və nəticədə kiçik hissəcik ölçüsü və yüksək EE yaranması ilə əlaqədardır. Lakin, pH 6.5-ə uyğunlaşdırıldıqda, xitosandakı amin qrupları deprotonlaşdı və nəticədə xitosan qatlanması baş verdi. Beləliklə, yüksək pH amin ionlarının TPP və insulinə daha az məruz qalmasına səbəb olur və bu da daha aşağı çarpaz əlaqə, daha böyük son orta hissəcik ölçüsü və daha aşağı EE ilə nəticələnir.
Dondurulmuş və spreylə qurudulmuş NP-lərin morfoloji xüsusiyyətlərinin təhlili daha yaxşı susuzlaşdırma və toz əmələ gətirmə üsullarının seçilməsinə istiqamət verə bilər. Üstünlük verilən metod dərman stabilliyi, vahid hissəcik forması, yüksək dərman yükü və orijinal məhlulda yaxşı həllolma təmin etməlidir. Bu tədqiqatda, iki üsulu daha yaxşı müqayisə etmək üçün susuzlaşdırma zamanı 1% mannitollu və ya olmayan insulin NP-ləri istifadə edilmişdir. Mannitol, dondurulmuş qurutma və spreylə qurutma üçün müxtəlif quru toz formulalarında qablaşdırma agenti və ya krioprotektor kimi istifadə olunur. Şəkil 2a-da göstərildiyi kimi, mannitolsuz liofilizasiya olunmuş insulin nanopartikulları üçün skanlama elektron mikroskopiyası (SEM) altında böyük, nizamsız və kobud səthlərə malik yüksək məsaməli toz quruluşu müşahidə edilmişdir. Susuzlaşdırmadan sonra tozda az sayda diskret hissəcik aşkar edilmişdir (Şəkil 2e). Bu nəticələr göstərir ki, əksər NP-lər heç bir krioprotektor olmadan dondurulmuş qurutma zamanı parçalanmışdır. 1% mannitol tərkibli dondurulmuş və spreylə qurudulmuş insulin nanopartikulları üçün hamar səthlərə malik sferik nanopartikullar müşahidə edilmişdir (Şəkil 1). 2b,d,f,h). Mannitol olmadan spreylə qurudulmuş insulin nanohissəcikləri sferik qaldı, lakin səthdə qırışlı qaldı (Şəkil 2c). Sferik və qırışlı səthlər aşağıdakı sərbəst buraxılma davranışı və hüceyrə udma testlərində daha ətraflı müzakirə olunur. Qurudulmuş NP-lərin görünən görünüşünə əsasən, həm mannitolsuz spreylə qurudulmuş NP-lər, həm də mannitol ilə dondurulmuş və spreylə qurudulmuş NP-lər incə NP tozları verdi (Şəkil 2f,g,h). Hissəcik səthləri arasındakı səth sahəsi nə qədər böyükdürsə, həllolma qabiliyyəti və buna görə də sərbəst buraxılma sürəti bir o qədər yüksəkdir.
Müxtəlif susuzlaşdırılmış insulin NP-lərinin morfologiyası: (a) Mannitolsuz liyofilizasiya olunmuş insulin NP-lərinin SEM görüntüsü; (b) Mannitollu liyofilizasiya olunmuş insulin NP-lərinin SEM görüntüsü; (c) Mannitolsuz spreylə qurudulmuş insulin NP-lərinin SEM görüntüsü; (d) Mannitollu spreylə qurudulmuş insulin NP-lərinin SEM görüntüsü; (e) Mannitolsuz liyofilizasiya olunmuş insulin NP-lərinin görüntüsü; (f) Mannitollu liyofilizasiya olunmuş insulin NP-lərinin görüntüsü; (g) Mannitolsuz spreylə qurudulmuş insulin NP-lərinin görüntüsü; (h) Mannitollu spreylə qurudulmuş insulin NP-lərinin görüntüsü.
Dondurma ilə qurutma zamanı mannitol krioprotektor kimi çıxış edir, NP-ləri amorf formada saxlayır və buz kristallarının zədələnməsinin qarşısını alır19. Bunun əksinə olaraq, sprey qurutma zamanı dondurma mərhələsi yoxdur. Buna görə də, bu üsulda mannitol tələb olunmur. Əslində, mannitolsuz spreylə qurudulmuş NP-lər əvvəllər təsvir edildiyi kimi daha incə NP-lər verir. Bununla belə, mannitol yenə də spreylə qurutma prosesində doldurucu kimi çıxış edərək NP-lərə daha sferik quruluş verir20 (Şəkil 2d), bu da belə kapsulalanmış NP-lərin vahid buraxılma davranışını əldə etməyə kömək edir. Bundan əlavə, həm dondurma ilə qurudulmuş, həm də mannitol ehtiva edən spreylə qurudulmuş insulin NP-lərində bəzi böyük hissəciklərin aşkar edilə biləcəyi aydındır (Şəkil 2b,d), bu da hissəcik nüvəsində kapsulalanmış insulinlə birlikdə mannitolun toplanması ilə əlaqəli ola bilər. Xitozan təbəqəsinə. Qeyd etmək lazımdır ki, bu tədqiqatda, susuzlaşdırmadan sonra sferik strukturun bütöv qalmasını təmin etmək üçün mannitol və xitozanın nisbəti 5:1 səviyyəsində saxlanılır ki, çox miqdarda doldurucu qurudulmuş NP-lərin hissəcik ölçüsünü də böyüdə bilsin.
Furye transformasiyası ilə infraqırmızı zəiflədilmiş tam əks (FTIR-ATR) spektroskopiyası sərbəst insulin, xitozan, xitozan, TPP və insulinin fiziki qarışığını xarakterizə etmişdir. Bütün susuzlaşdırılmış NP-lər FTIR-ATR spektroskopiyası istifadə edilərək xarakterizə edilmişdir. Xüsusilə, mannitol ilə dondurulmuş şəkildə qurudulmuş kapsulalanmış NP-lərdə və mannitol ilə və mannitolsuz spreylə qurudulmuş NP-lərdə 1641, 1543 və 1412 sm-1 zolaq intensivliyi müşahidə edilmişdir (Şəkil 3). Əvvəllər bildirildiyi kimi, gücdəki bu artımlar xitozan, TPP və insulin arasında çarpaz əlaqə ilə əlaqələndirilmişdir. Xitozan və insulin arasındakı qarşılıqlı təsirin araşdırılması göstərdi ki, insulinlə yüklənmiş xitozan nanopartikullarının FTIR spektrlərində xitozan zolağı insulin zolağı ilə üst-üstə düşür və karbonil intensivliyini (1641 sm-1) və amin (1543 sm-1) kəmərini artırır. TPP-nin tripolifosfat qrupları xitozandakı ammonium qrupları ilə əlaqələndirilir, 1412 sm-1-də bir zolaq əmələ gətirir.
Müxtəlif üsullarla susuzlaşdırılmış sərbəst insulin, xitosan, xitosan/TPP/insulinin fiziki qarışıqları və NP-lərin FTIR-ATR spektrləri.
Bundan əlavə, bu nəticələr SEM-də göstərilən nəticələrlə uyğundur, bu nəticələr göstərir ki, kapsulalanmış NP-lər həm mannitol ilə püskürdüldükdə, həm də dondurularaq qurudulduqda toxunulmaz qalır, lakin mannitol olmadıqda, yalnız püskürtmə ilə qurutma kapsulalanmış hissəciklər əmələ gətirir. Bunun əksinə olaraq, mannitol olmadan dondurularaq qurudulmuş NP-lərin FTIR-ATR spektral nəticələri xitosan, TPP və insulinin fiziki qarışığına çox oxşar idi. Bu nəticə göstərir ki, xitosan, TPP və insulin arasındakı çarpaz əlaqələr artıq mannitol olmadan dondurularaq qurudulmuş NP-lərdə mövcud deyil. NP-lərin strukturu krioprotektor olmadan dondurularaq qurutma zamanı məhv edilmişdir ki, bunu SEM nəticələrində görmək olar (Şəkil 2a). Qurudulmuş insulin NP-lərinin morfologiyasına və FTIR nəticələrinə əsasən, mannitolsuz NP-lərin parçalanması səbəbindən bərpa təcrübələri və mannitolsuz NP-lər üçün yalnız liofilizasiya edilmiş, püskürtmə ilə qurudulmuş və mannitolsuz NP-lər istifadə edilmişdir. susuzlaşdırma. müzakirə edin.
Dehidratasiya uzunmüddətli saxlama və digər formulalara təkrar emal üçün istifadə olunur. Quru NP-lərin saxlanmadan sonra yenidən formalaşma qabiliyyəti onların tablet və film kimi müxtəlif formulalarda istifadəsi üçün vacibdir. Mannitol olmadan spreylə qurudulmuş insulin NP-lərinin orta hissəcik ölçüsünün yenidən qurulduqdan sonra yalnız bir qədər artdığını müşahidə etdik. Digər tərəfdən, spreylə qurudulmuş və dondurulmuş qurudulmuş insulin nanopartikullarının hissəcik ölçüsü mannitol ilə əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır (Cədvəl 1). Bu tədqiqatda bütün NP-lərin rekombinasiyasından sonra PDI və EE əhəmiyyətli dərəcədə dəyişməmişdir (p > 0,05) (Cədvəl 1). Bu nəticə göstərir ki, hissəciklərin əksəriyyəti yenidən həll edildikdən sonra bütöv qalmışdır. Lakin, mannitolun əlavə edilməsi liofilizasiya edilmiş və spreylə qurudulmuş mannitol nanopartikullarının insulin yükünü xeyli azaltmışdır (Cədvəl 1). Əksinə, mannitol olmadan spreylə qurudulmuş NP-lərin insulin yük tərkibi əvvəlki kimi qalmışdır (Cədvəl 1).
Nanopartikulların yüklənməsinin dərman çatdırılması məqsədləri üçün istifadə edildikdə çox vacib olduğu məlumdur. Aşağı yüklənməli NP-lər üçün terapevtik həddə çatmaq üçün çox miqdarda material tələb olunur. Lakin, bu cür yüksək NP konsentrasiyalarının yüksək özlülüyü müvafiq olaraq ağızdan qəbulda və inyeksiya edilə bilən formulalarda narahatlıq və çətinlik yaradır 22. Bundan əlavə, insulin NP-ləri tabletlər və özlü biofilmlər hazırlamaq üçün də istifadə edilə bilər 23, 24 ki, bu da aşağı yükləmə səviyyələrində çoxlu miqdarda NP-lərin istifadəsini tələb edir və nəticədə ağızdan tətbiq üçün uyğun olmayan böyük tabletlər və qalın biofilmlər yaranır. Buna görə də, yüksək insulin yüklü susuzlaşdırılmış NP-lər çox arzuolunandır. Nəticələrimiz göstərir ki, mannitolsuz spreylə qurudulmuş NP-lərin yüksək insulin yükü bu alternativ çatdırılma metodları üçün bir çox cəlbedici üstünlüklər təklif edə bilər.
Bütün susuzlaşdırılmış NP-lər üç ay soyuducuda saxlanıldı. SEM nəticələri göstərdi ki, bütün susuzlaşdırılmış NP-lərin morfologiyası üç aylıq saxlama müddətində əhəmiyyətli dərəcədə dəyişməyib (Şəkil 4). Suda həll edildikdən sonra, bütün NP-lər EE-də bir qədər azalma göstərdi və üç aylıq saxlama müddətində təxminən az miqdarda (~5%) insulin buraxdı (Cədvəl 2). Lakin, bütün nanopartikulların orta hissəcik ölçüsü artdı. Mannitol olmadan spreylə qurudulmuş NP-lərin hissəcik ölçüsü 525 nm-ə, mannitol ilə spreylə qurudulmuş və dondurulmuş şəkildə qurudulmuş NP-lərin isə hissəcik ölçüsü müvafiq olaraq 872 və 921 nm-ə qədər artdı (Cədvəl 2).
Üç ay saxlanılan müxtəlif susuzlaşdırılmış insulin NP-lərinin morfologiyası: (a) Mannitollu liyofilizasiya olunmuş insulin NP-lərinin SEM görüntüsü; (b) Mannitolsuz spreylə qurudulmuş insulin nanohissəciklərinin SEM görüntüsü; (c) mannitolsuz Spreylə qurudulmuş insulin NP-lərinin SEM görüntüləri.
Bundan əlavə, mannitol ilə spreylə qurudulmuş və dondurularaq qurudulmuş bərpa olunmuş insulin nanopartikullarında çöküntülər müşahidə edilmişdir (Şəkil S2). Bu, böyük hissəciklərin suda düzgün şəkildə asılı qalmaması nəticəsində yarana bilər. Yuxarıda göstərilən bütün nəticələr göstərir ki, spreylə qurutma texnikası insulin nanopartikullarını susuzlaşmadan qoruya bilər və heç bir doldurucu və ya krioprotektor olmadan yüksək miqdarda insulin nanopartikulları əldə etmək mümkündür.
İnsulin saxlanması, NP-lərin susuzlaşdırmadan sonra fermentativ həzmə qarşı qoruyucu qabiliyyətini nümayiş etdirmək üçün pH = 2.5 mühitdə pepsin, tripsin və α-ximotripsin ilə sınaqdan keçirilmişdir. Susuzlaşdırılmış NP-lərin insulin saxlanması yeni hazırlanmış NP-lərlə müqayisə edilmiş və sərbəst insulin mənfi nəzarət kimi istifadə edilmişdir. Bu tədqiqatda sərbəst insulin hər üç fermentativ müalicədə 4 saat ərzində insulinin sürətli eliminasiyasını göstərmişdir (Şəkil 5a–c). Bunun əksinə olaraq, mannitol ilə dondurulmuş şəkildə qurudulmuş NP-lərin və mannitol ilə və ya mannitolsuz spreylə qurudulmuş NP-lərin insulin eliminasiya testi bu NP-lərin fermentativ həzmə qarşı əhəmiyyətli dərəcədə daha yüksək qorunmasını göstərmişdir ki, bu da yeni hazırlanmış insulin NP-lərinə bənzərdir (şəkil 1).5a-c). Pepsin, tripsin və α-ximotripsindəki nanohissəciklərin köməyi ilə insulinin 50%, 60% və 75%-dən çoxu müvafiq olaraq 4 saat ərzində qorunmaq mümkün olmuşdur (Şəkil 5a–c). Bu insulin qoruyucu qabiliyyəti qan dövranına daha yüksək insulin udma şansını artıra bilər25. Bu nəticələr göstərir ki, mannitol ilə və ya mannitolsuz sprey qurutma və mannitol ilə dondurma ilə qurutma susuzlaşdırmadan sonra NP-lərin insulin qoruyucu qabiliyyətini qoruya bilər.
Susuzlaşdırılmış insulin NP-lərinin qorunması və sərbəst buraxılma davranışı: (a) pepsin məhlulunda insulinin qorunması; (b) tripsin məhlulunda insulinin qorunması; (c) insulinin α-ximotripsin məhlulu ilə qorunması; (d) pH = 2.5 məhlulunda susuzlaşdırılmış NP-lərin sərbəst buraxılma davranışı; (e) pH = 6.6 məhlulunda susuzlaşdırılmış NP-lərin sərbəst buraxılma davranışı; (f) pH = 7.0 məhlulunda susuzlaşdırılmış NP-lərin sərbəst buraxılma davranışı.
Təzə hazırlanmış və bərpa olunmuş quru insulin NP-ləri, insulinin insulin müqavimətinə təsirini araşdırmaq üçün mədə, onikibarmaq bağırsağın və yuxarı nazik bağırsağın pH mühitini simulyasiya edərək 37 °C-də müxtəlif buferlərdə (pH = 2.5, 6.6, 7.0) inkubasiya edildi. Müxtəlif mühitlərdə sərbəst buraxılma davranışı. Mədə-bağırsaq traktının fraqmenti. pH = 2.5 səviyyəsində insulinlə yüklənmiş NP-lər və yenidən həll olmuş quru insulin NP-ləri ilk bir saat ərzində ilkin partlayış sərbəst buraxılmasını, ardınca isə növbəti 5 saat ərzində yavaş sərbəst buraxılmasını göstərdi (Şəkil 5d). Başlanğıcdakı bu sürətli sərbəst buraxılma, çox güman ki, hissəciyin daxili strukturunda tam immobilizasiya olunmamış zülal molekullarının sürətli səth desorbsiyasının nəticəsidir. pH = 6.5 səviyyəsində insulinlə yüklənmiş NP-lər və bərpa olunmuş quru insulin NP-ləri 6 saat ərzində hamar və yavaş sərbəst buraxılma göstərdi, çünki sınaq məhlulunun pH-ı NP-lərlə hazırlanmış məhlulun pH-ına bənzər idi (Şəkil 5e). pH = 7 səviyyəsində NP-lər qeyri-sabit idi və ilk iki saat ərzində demək olar ki, tamamilə parçalandı (Şəkil 5f). Bunun səbəbi, xitozanın deprotonlaşmasının daha yüksək pH-da baş verməsidir ki, bu da daha az kompakt polimer şəbəkəsinə və yüklənmiş insulinin sərbəst buraxılmasına səbəb olur.
Bundan əlavə, mannitol olmadan spreylə qurudulmuş insulin NP-ləri digər qurudulmuş NP-lərə nisbətən daha sürətli ifraz profili göstərmişdir (Şəkil 5d–f). Əvvəllər təsvir edildiyi kimi, mannitol olmadan qurudulmuş bərpa olunmuş insulin NP-ləri ən kiçik hissəcik ölçüsünü göstərmişdir. Kiçik hissəciklər daha böyük bir səth sahəsi təmin edir, buna görə də müvafiq dərmanın əksəriyyəti hissəcik səthində və ya yaxınlığında olacaq və bu da dərmanın sürətli ifrazına səbəb olur26.
NP-lərin sitotoksikliyi MTT analizi ilə araşdırılmışdır. Şəkil S4-də göstərildiyi kimi, bütün susuzlaşdırılmış NP-lərin 50-500 μq/ml konsentrasiyalarında hüceyrənin canlılığına əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərmədiyi aşkar edilmişdir ki, bu da bütün susuzlaşdırılmış NP-lərin terapevtik pəncərəyə çatmaq üçün təhlükəsiz şəkildə istifadə edilə biləcəyini göstərir.
Qaraciyər insulinin fizioloji funksiyalarını yerinə yetirdiyi əsas orqandır. HepG2 hüceyrələri, in vitro hepatositlərin udma modeli kimi geniş istifadə edilən insan hepatoma hüceyrə xəttidir. Burada HepG2 hüceyrələri dondurma ilə qurutma və sprey-qurutma üsulları ilə susuzlaşdırılmış NP-lərin hüceyrə udulmasını qiymətləndirmək üçün istifadə edilmişdir. 25 μg/ml konsentrasiyasında sərbəst FITC insulin ilə bir neçə saatlıq inkubasiyadan sonra axın sitometriyası və görmə ilə konfokal lazer skanlama yolu ilə hüceyrə udulması, təzə hazırlanmış FITC insulinlə yüklənmiş NP-lər və bərabər insulin konsentrasiyalarında susuzlaşdırılmış FITC insulinlə yüklənmiş NP-lər. Kəmiyyət mikroskopiyası (CLSM) müşahidələri aparılmışdır. Mannitolsuz liyofilizasiya olunmuş NP-lər susuzlaşdırma zamanı məhv edilmiş və bu testdə qiymətləndirilməmişdir. Təzə hazırlanmış insulinlə yüklənmiş NP-lərin, mannitollu liyofilizasiya olunmuş NP-lərin və mannitollu və mannitolsuz sprey-qurutma olunmuş NP-lərin (Şəkil 6a) hüceyrədaxili flüoresans intensivliyi 4.3 olmuşdur. sərbəst olanlardan 2.6, 2.4 və 4.1 dəfə yüksəkdir. Müvafiq olaraq FITC-insulin qrupu (Şəkil 6b). Bu nəticələr göstərir ki, kapsulalanmış insulin hüceyrə tərəfindən mənimsənilmədə sərbəst insulinə nisbətən daha güclüdür, bu da əsasən tədqiqatda istehsal olunan insulinlə yüklənmiş nanohissəciklərin daha kiçik ölçüsünə bağlıdır.
Təzə hazırlanmış NP-lər və susuzlaşdırılmış NP-lərlə 4 saatlıq inkubasiyadan sonra HepG2 hüceyrələrinin mənimsənilməsi: (a) HepG2 hüceyrələri tərəfindən FITC-insulin mənimsənilməsinin paylanması.(b) Axın sitometriyası ilə təhlil edilən flüoresans intensivliklərinin həndəsi ortalaması (n = 3), sərbəst insulinlə müqayisədə *P < 0.05.
Eynilə, CLSM şəkilləri göstərdi ki, yeni hazırlanmış FITC-insulin yüklü NP-lərin və FITC-insulin yüklü spreylə qurudulmuş NP-lərin (mannitolsuz) FITC flüoresans intensivliyi digər nümunələrə nisbətən daha güclü idi (Şəkil 6a). Bundan əlavə, mannitol əlavə edildikdə, məhlulun daha yüksək özlülüyü hüceyrə udulmasına qarşı müqaviməti artırdı və nəticədə insulin proliferasiyasının azalması müşahidə edildi. Bu nəticələr göstərir ki, mannitolsuz spreylə qurudulmuş NP-lər ən yüksək hüceyrə udma səmərəliliyini nümayiş etdirdilər, çünki onların hissəcik ölçüsü yenidən həll edildikdən sonra dondurulmuş qurudulmuş NP-lərdən daha kiçik idi.
Xitozan (orta molekulyar çəkisi 100 KDa, 75–85% deasetilləşdirilmiş) Sigma-Aldrich-dən (Oakville, Ontario, Kanada) alınmışdır. Natrium tripolifosfat (TPP) VWR-dən (Radnor, Pensilvaniya, ABŞ) alınmışdır. Bu tədqiqatda istifadə edilən rekombinant insan insulini Fisher Scientific-dən (Waltham, MA, ABŞ) alınmışdır. Flüoresein izotiyosiyanat (FITC) ilə işarələnmiş insan insulini və 4′,6-diamidino-2-fenilindol dihidroxlorid (DAPI) Sigma-Aldrich-dən (Oakville, Ontario, Kanada) alınmışdır. HepG2 hüceyrə xətti ATCC-dən (Manassas, Virciniya, ABŞ) əldə edilmişdir. Bütün digər reagentlər analitik və ya xromatoqrafik dərəcəli idi.
1 mq/ml CS məhlulunu 0,1% sirkə turşusu olan ikiqat distillə edilmiş suda (DD suyu) həll edərək hazırlayın. 1 mq/ml TPP və insulin məhlullarını müvafiq olaraq DD suyu və 0,1% sirkə turşusunda həll edərək hazırlayın. Əvvəlcədən emulsiya politron PCU-2-110 yüksək sürətli homogenizatoru (Brinkmann Ind. Westbury, NY, ABŞ) ilə hazırlanmışdır. Hazırlama prosesi aşağıdakı kimidir: əvvəlcə 4 ml insulin məhluluna 2 ml TPP məhlulu əlavə edilir və qarışıq 30 dəqiqə qarışdırılır və tam qarışdırılır. Daha sonra qarışıq məhlul yüksək sürətli qarışdırma (10,000 dövr/dəq) altında şpris vasitəsilə CS məhluluna damcı şəklində əlavə edilir. Qarışıqlar buzlu vannada 30 dəqiqə yüksək sürətli qarışdırma (15,000 dövr/dəq) altında saxlanılır və çarpaz əlaqəli insulin NP-ləri əldə etmək üçün müəyyən bir pH-a uyğunlaşdırılır. İnsulin NP-lərinin daha da homogenləşdirilməsi və hissəcik ölçüsünü azaltmaq üçün onlar... zond tipli sonikator (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Almaniya) istifadə edərək buz vannasında əlavə 30 dəqiqə ərzində ultrasəslə işlənmişdir.
İnsulin NPS-ləri, 25°C-də DD suyunda durulaşdırılaraq Litesizer 500 (Anton Paar, Qrats, Avstriya) istifadə edilərək dinamik işıq səpələnməsi (DLS) ölçmələrindən istifadə edilərək Z-orta diametr, polidisperslik indeksi (PDI) və zeta potensialı üçün sınaqdan keçirilmişdir. Morfologiya və ölçü paylanması Hitachi H7600 ötürücü elektron mikroskopu (TEM) (Hitachi, Tokio, Yaponiya) ilə xarakterizə edilmiş və təsvirlər sonradan Hitachi görüntüləmə proqramı (Hitachi, Tokio, Yaponiya) istifadə edilərək təhlil edilmişdir. İnsulin NP-lərinin kapsullaşdırma səmərəliliyini (EE) və yükləmə qabiliyyətini (LC) qiymətləndirmək üçün NP-lər 100 kDa molekulyar çəki kəsiyi olan ultrafiltrasiya borularına pipetlə doldurulmuş və 30 dəqiqə ərzində 500 xg-də santrifüj edilmişdir. Filtratdakı kapsullanmamış insulin, dördüncü nasosdan ibarət Agilent 1100 Seriyası HPLC sistemi (Agilent, Santa Clara, Kaliforniya, ABŞ) istifadə edilərək kəmiyyətləndirilmişdir. avtomatik nümunə götürən, sütun qızdırıcısı və DAD detektoru. İnsulin C18 sütunu (Zorbax, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, Agilent, ABŞ) ilə təhlil edilmiş və 214 nm-də aşkar edilmişdir. Mobil faza asetonitril və sudan ibarət idi, tərkibində 0.1% TFA var idi, qradiyent nisbətləri 10/90-dan 100/0-a qədər idi və 10 dəqiqə işlədi. Mobil faza 1.0 ml/dəq axın sürəti ilə vuruldu. Sütunun temperaturu 20 °C-yə təyin edildi. (1) və (2) tənliklərindən istifadə edərək EE və LC faizlərini hesablayın.
İnsulin NP-ni optimallaşdırmaq üçün 2.0 ilə 4.0 arasında dəyişən müxtəlif CS/insulin nisbətləri sınaqdan keçirildi. Hazırlıq zamanı müxtəlif miqdarda CS məhlulu əlavə edildi, insulin/TPP qarışığı isə sabit saxlanıldı. Bütün məhlulları (insulin, TPP və CS) əlavə etdikdən sonra qarışığın pH-nı diqqətlə idarə etməklə insulin NP-ləri 4.0 ilə 6.5 pH aralığında hazırlanmışdır. İnsulin NP-lərinin əmələ gəlməsini optimallaşdırmaq üçün insulin nanopartikullarının EE və hissəcik ölçüsü müxtəlif pH dəyərlərində və CS/insulin kütlə nisbətlərində qiymətləndirildi.
Optimallaşdırılmış insulin NP-ləri alüminium qaba yerləşdirildi və bir az lentlə bərkidilmiş toxuma ilə örtüldü. Daha sonra, vintli qablar qab qurutma maşını ilə təchiz olunmuş Labconco FreeZone dondurucu qurutma maşınına (Labconco, Kanzas Siti, MO, ABŞ) yerləşdirildi. Quru insulin NP-ləri əldə etmək üçün temperatur və vakuum təzyiqi ilk 2 saat ərzində -10 °C, 0.350 Torr, 24 saatın qalan 22 saatı üçün isə 0 °C və 0.120 Torr olaraq təyin edildi.
Kapsulalı insulin istehsal etmək üçün Buchi Mini Sprey Qurutma Maşını B-290 (BÜCHI, Flawil, İsveçrə) istifadə edilmişdir. Seçilmiş qurutma parametrləri bunlar idi: temperatur 100 °C, qidalanma axını 3 L/dəq və qaz axını 4 L/dəq.
Susuzlaşmadan əvvəl və sonra insulin NP-ləri FTIR-ATR spektroskopiyası ilə xarakterizə edilmişdir. Susuzlaşdırılmış nanopartiküllər, eləcə də sərbəst insulin və xitozan universal ATR nümunə götürmə aksesuarı (PerkinElmer, Waltham, Massaçusets, ABŞ) ilə təchiz olunmuş Spectrum 100 FTIR spektrofotometri (PerkinElmer, Waltham, Massaçusets, ABŞ) istifadə edilərək təhlil edilmişdir. Siqnal ortalamaları 4000-600 sm2 tezlik diapazonunda 4 sm2 qətnamə ilə 16 skandan əldə edilmişdir.
Quru insulin NP-lərinin morfologiyası, Helios NanoLab 650 Fokuslu İon Şüa Skan Elektron Mikroskopu (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, ABŞ) tərəfindən çəkilmiş dondurulmuş və spreylə qurudulmuş insulin NP-lərinin SEM görüntüləri ilə qiymətləndirilmişdir. İstifadə olunan əsas parametr 5 keV gərginlik və 30 mA cərəyan idi.
Bütün susuzlaşdırılmış insulin NP-ləri dd suyunda yenidən həll edildi. Hissəcik ölçüsü, PDI, EE və LC susuzlaşdırmadan sonra keyfiyyətini qiymətləndirmək üçün əvvəllər qeyd olunan eyni metoddan istifadə edərək yenidən sınaqdan keçirildi. Anhidroinsulin NP-lərinin stabilliyi də uzun müddət saxlandıqdan sonra NP-lərin xüsusiyyətlərini sınaqdan keçirməklə ölçüldü. Bu tədqiqatda susuzlaşdırmadan sonra bütün NP-lər üç ay soyuducuda saxlanıldı. Üç aylıq saxlama müddətindən sonra NP-lər morfoloji hissəcik ölçüsü, PDI, EE və LC üçün sınaqdan keçirildi.
Susuzlaşmadan sonra NP-lərin qorunmasında insulinin effektivliyini qiymətləndirmək üçün 5 ml bərpa olunmuş NP-ləri simulyasiya edilmiş mədə mayesi (pH 1.2, tərkibində 1% pepsin), bağırsaq mayesi (pH 6.8, tərkibində 1% tripsin) və ya ximotripsin məhlulu (100 q/ml, fosfat buferində, pH 7.8) olan 45 ml-də həll edin. Onlar 37°C-də 100 dövr/dəq qarışdırma sürəti ilə inkubasiya edildi. Müxtəlif vaxt nöqtələrində 500 μL məhlul toplandı və insulin konsentrasiyası HPLC ilə təyin edildi.
Təzə hazırlanmış və susuzlaşdırılmış insulin NP-lərinin in vitro sərbəst buraxılma davranışı dializ torbası metodu ilə sınaqdan keçirilmişdir (molekulyar çəki kəsimi 100 kDa, Spectra Por Inc.). Təzə hazırlanmış və bərpa edilmiş quru NP-lər mədə, onikibarmaq bağırsağın və yuxarı nazik bağırsağın pH mühitini simulyasiya etmək üçün müvafiq olaraq pH 2.5, pH 6.6 və pH 7.0 (0.1 M fosfat buferli salin, PBS) mayelərində dializ edilmişdir. Bütün nümunələr 37 °C-də 200 dövr/dəq-də davamlı çalxalanma ilə inkubasiya edilmişdir. Mayeni 5 ml dializ torbasının xaricində aşağıdakı vaxtlarda sorun: 0.5, 1, 2, 3, 4 və 6 saat və dərhal həcmi təzə dializatla doldurun. Mayedəki insulin çirklənməsi HPLC ilə təhlil edilmiş və nanopartikullardan insulinin sərbəst buraxılma sürəti sərbəst buraxılan sərbəst insulinin nanopartikullarda kapsulalanmış ümumi insulinə nisbətindən hesablanmışdır. (Tənlik 3).
İnsan hepatosellüler karsinoma hüceyrə xətti HepG2 hüceyrələri 10% döl mal-qara serumu, 100 BV/ml penisilin və 100 μq/ml streptomisin tərkibli Dulbecco Modified Eagle's Medium (DMEM) istifadə edərək 60 mm diametrli qablarda yetişdirilmişdir29. Kulturalar 37°C, 95% nisbi rütubət və 5% CO2-də saxlanılmışdır. Udma analizləri üçün HepG2 hüceyrələri 1 × 105 hüceyrə/ml nisbətində 8 quyulu Nunc Lab-Tek kameralı slayd sisteminə (Thermo Fisher, NY, ABŞ) əkilmişdir. Sitotoksiklik analizləri üçün onlar 5 × 104 hüceyrə/ml sıxlığında 96 quyulu lövhələrə (Corning, NY, ABŞ) əkilmişdir.
MTT analizi, təzə hazırlanmış və susuzlaşdırılmış insulin NPs30-un sitotoksikliyini qiymətləndirmək üçün istifadə edilmişdir. HepG2 hüceyrələri 5 × 104 hüceyrə/ml sıxlığında 96 quyulu lövhələrə əkilmiş və sınaqdan 7 gün əvvəl becərilmişdir. İnsulin NP-ləri becərmə mühitində müxtəlif konsentrasiyalara (50-500 μq/ml) qədər durulaşdırılmış və sonra hüceyrələrə yeridilmişdir. 24 saatlıq inkubasiyadan sonra hüceyrələr 3 dəfə PBS ilə yuyulmuş və əlavə 4 saat ərzində 0,5 mq/ml MTT olan mühitdə inkubasiya edilmişdir. Sitotoksiklik, Tecan infinite M200 pro spektrofotometr lövhə oxuyucusundan (Tecan, Männedorf, İsveçrə) istifadə edərək 570 nm-də sarı tetrazolium MTT-nin bənövşəyi formazana enzimatik reduksiyasını ölçməklə qiymətləndirilmişdir.
NP-lərin hüceyrə udma səmərəliliyi konfokal lazer skanlama mikroskopiyası və axın sitometriyası təhlili ilə sınaqdan keçirilmişdir. Nunc Lab-Tek kamera slayd sisteminin hər bir quyusu sərbəst FITC-insulin, FITC-insulin yüklü NP-lərlə işlənmiş və eyni konsentrasiyada 25 μq/ml susuzlaşdırılmış FITC-insulin NP-ləri yenidən qurulmuş və 4 saat inkubasiya edilmişdir. Hüceyrələr PBS ilə 3 dəfə yuyulmuş və 4% paraformaldehid ilə fiksasiya edilmişdir. Nüvələr 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) ilə boyanmışdır. İnsulinin lokalizasiyası Olympus FV1000 lazer skanlama/iki fotonlu konfokal mikroskop (Olympus, Shinjuku City, Tokio, Yaponiya) istifadə edilərək müşahidə edilmişdir. Axın sitometriyası təhlili üçün eyni konsentrasiyalarda 10 μq/ml sərbəst FITC-insulin, FITC-insulin yüklü NP-lər və yenidən həll olunmuş susuzlaşdırılmış FITC-insulin NP-ləri HepG2 hüceyrələri ilə səpilmiş 96 quyulu lövhələrə əlavə edildi və 4 saat inkubasiya edildi. 4 saatlıq inkubasiyadan sonra hüceyrələr çıxarıldı və FBS ilə 3 dəfə yuyuldu. Nümunə başına 5 × 104 hüceyrə BD LSR II axın sitometri (BD, Franklin Lakes, Nyu-Cersi, Amerika Birləşmiş Ştatları) ilə təhlil edildi.
Bütün dəyərlər orta ± standart sapma kimi ifadə olunur. Bütün qruplar arasındakı müqayisələr IBM SPSS Statistics 26 for Mac (IBM, Endicott, New York, USA) tərəfindən birtərəfli ANOVA və ya t-test istifadə edilərək qiymətləndirilmiş və p < 0.05 statistik cəhətdən əhəmiyyətli hesab edilmişdir.
Bu tədqiqat, sprey qurutmanın çarpaz əlaqəli xitosan/TPP/insulin nanopartikullarını susuzlaşdırmaq üçün elastikliyini və qabiliyyətini nümayiş etdirir, bu da standart dondurma-qurutma üsulları ilə müqayisədə daha yaxşı bərpa olunma və daha yüksək yükləmə qabiliyyəti ilə təmin edir. Optimallaşdırılmış insulin nanopartikulları orta hissəcik ölçüsü 318 nm və kapsullaşdırma səmərəliliyi 99,4% təşkil etmişdir. Susuzlaşdırmadan sonra SEM və FTIR nəticələri göstərdi ki, sferik struktur yalnız mannitollu və mannitolsuz və mannitolsuz spreylə qurudulmuş NP-lərdə saxlanılmışdır, lakin mannitolsuz liofilizasiya olunmuş NP-lər susuzlaşdırma zamanı parçalanmışdır. Bərpa qabiliyyəti testində mannitolsuz spreylə qurudulmuş insulin nanopartikulları ən kiçik orta hissəcik ölçüsünü və bərpa zamanı ən yüksək yükü göstərmişdir. Bütün bu susuzlaşdırılmış NP-lərin sərbəst buraxılma davranışları göstərdi ki, onlar pH = 2,5 və pH = 7 olan məhlullarda sürətlə sərbəst buraxılır və pH = 6,5 olan məhlullarda çox sabitdir. Digər yenidən həll olunmuşlarla müqayisədə susuzlaşdırılmış NP-lərdə, mannitol olmadan spreylə qurudulmuş NP-lər ən sürətli sərbəst buraxılış göstərdi. Bu nəticə hüceyrə udma analizində müşahidə edilən nəticə ilə uyğundur, çünki mannitol olmadan spreylə qurudulmuş NP-lər təzə hazırlanmış NP-lərin hüceyrə udma səmərəliliyini demək olar ki, tamamilə qoruyub saxlamışdır. Bu nəticələr göstərir ki, mannitolsuz spreylə qurutma yolu ilə hazırlanmış quru insulin nanopartikülləri oral tabletlər və ya bioyapışqan filmlər kimi digər susuz dozaj formalarına sonrakı emal üçün ən uyğundur.
Əqli mülkiyyət problemləri səbəbindən, cari tədqiqat zamanı yaradılan və/və ya təhlil edilən məlumat dəstləri ictimaiyyət üçün açıq deyil, lakin müvafiq müəlliflərdən ağlabatan tələb olduqda əldə edilə bilər.
Kagan, A. 2-ci tip diabet: sosial və elmi mənşəy, tibbi ağırlaşmalar və xəstələr və başqaları üçün nəticələr. (McFarlane, 2009).
Singh, AP, Guo, Y., Singh, A., Xie, W. & Jiang, P. İnsulin kapsulasının inkişafı: oral qəbul artıq mümkündürmü? J. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1, 74–92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Diabetin müalicəsi üçün oral insulinlə yüklənmiş liposom çatdırılma sistemlərində son irəliləyişlər. Interpretation. J. Pharmacy.549, 201–217 (2018).